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相關文獻
RNA提取
細胞樣品 組織樣品 血液樣品 cell-free樣品 RNA提取
Total RNA 抽提（ Trizol 法）
1、組織樣品，每 100mg 組織加入 1ml Trizol，用液氮研磨或采用電動勻漿器充分打碎組織塊）。細胞則根據其生長類型（貼壁、懸?。┘尤胂鄳康?Trizol。
2、每 1ml 用于抽提的 Trizol 加入 200μl 的氯仿，上下顛倒充分混勻 1min 左右，室溫靜置 5 min。
3、 4℃， 12,000rpm 離心 15 min。 (optional)總 RNA 的純化（ RNeasy Kit）通常在使用 Trizol 法抽提組織總 RNA時，因為方法的限制，造成總 RNA 的純度降低。所以建議使用 QIAGEN RNeasy Kit 進一步的純化。
詳細操作原理和方法見 Rneasy Mini Protocol for RNA Cleanup
1） 取總 RNA≤100μg 溶解于 100μl RNase-free 的水中，再加入 350μl Buffer RLT 并充分混勻。
2） 加入 250μl 無水乙醇， Tip 頭充分混勻。
3） 將共計 700μl 含總 RNA 的溶液轉入套在 2ml 離心管內的 RNeasy mini 柱子內，≥8000g 離心 15-30sec，棄去
濾過液。
4）吸取 500μl Buffer RPE 到 RNeasy mini 柱子內，≥8000g 離心洗滌 15-30sec，棄去濾過液，再用 500μl Buffer RPE在≥8000g 離心洗滌 2min，棄去濾過液和 2ml 的套管，將 RNeasy mini 柱子轉入一新的 1.5 ml Eppendorf 管中。
5） 吸取 40 μlRNase free 的水，≥8000g 離心洗脫 1 min。
6） 重復步驟 5 一次。
7） 測定 OD 值（通常 OD 數值在 1.8-2.1 之間），并做進一步的 RNA 質量檢測。
Totaol RNA提取注意事項
1、用于 RNA 提取的試劑及其他物品必須為 RNase-free 的，并且在潔凈、 不通風的環境中進行實驗。
2、客戶應當選用 Trizol 或 RNeasy 等自己熟悉的或公認可以得到良好實驗結果的提取方法進行總 RNA 的提取。
3、可以根據實際需要選擇 RNA 的保存方法：需要長期保存 RNA 保存于 75％乙醇中；無需長期保存的 RNA 樣本保存于 RNase free 的雙蒸水或 Elution buffer 中。
4、建議客戶送樣時提供保存于 RNase free 的雙蒸水或 Elution buffer 中的 RNA 樣本。
5、建議客戶送樣時提供 RNA 樣本的電泳圖譜以及相關 OD 值等實驗數據。
6、 RNA 樣本的保存介質請務必在樣本信息登記單上加以說明。
7、 RNA 樣本完全干燥后很難溶于水，因此不要提供干燥狀態的 RNA 樣本。
8、樣本到達本公司后，技術服務平臺將在規定的工作日內進行質檢。
9、經質檢證明 RNA 樣本無法繼續實驗時，市場部將及時與客戶聯系，協商進一步處理事宜。由于中間環節中不確定因素的存在， RNA 樣本的質量以我公司質檢部檢測得到的數據為準！
